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基因敲除

技术简介

       根据目的基因序列设计合成sgRNA,将Cas9和sgRNA基因转染目的细胞,通过sgRNA引导Cas9核酸酶对目的基因位点进行切割,引起DNA双链断裂(DSB),通过细胞自身的非同源末端修复(NHEJ)途径造成目的基因片段缺失或移码突变,进而实现目的基因敲除。

技术优势

  • 经过优化的CRISPR/Cas9系统,适用于更广泛的哺乳动物细胞,提高了编辑率高,同时大大降低了脱靶效应。
  • 多种方案可供选择,满足不同研究需要。

技术特点

适用范围

实验流程

载体信息

方案选择

  敲除效率 实验周期 优点 缺点
PiggyBac转座酶整合方案 操作方便 不适用于转染效率低的细胞
慢病毒感染方案 较长 能感染大部分难转染细胞 需要包装慢病毒
瞬时转染方案 较长 不整合外源基因到细胞基因组中 耗时较长,阳性率相对较低

服务标准

客户提供:
  • 待敲除Gene ID;
  • 目的细胞(可选择由派致代购);
  • 完全培养基1-2 L(派致提供DMEM及1640常规培养基)。
派致交付:按方指定案构建的细胞系及项目报告。
交付周期:6-12周,具体时间取决于方案选择、敲除靶点复杂程度及细胞生长情况。

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FAQ

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