基因编辑试剂盒
即用型CRISPR基因编辑试剂盒，用于敲除和突变应用
Quick KO® 是即用型（all-in-one）基因编辑敲除试剂盒，基于Ⅱ型 CRISPR-Cas 系统开发。试剂盒内含表达已验证高效切割的 gRNA 载体、转染/感染试剂及验证套装，通过质粒转染或慢病毒感染两种递送方式，在细胞体内表达多导向 sgRNA，引导 Cas9 核酸酶对靶基因进行切割，产生 DNA 双链断裂，利用细胞自身的非同源末端连接（NHEJ）机制，实现基因功能的敲除。
根据不同细胞类型的转染难易程度，可选用质粒转染方案或慢病毒感染方案，无需单独抽提质粒或包装慢病毒。
产品特点
- 即用型： All-in-one 设计，内含质粒、PCR酶及验证套装。
- 多导向 sgRNA 设计： 经优化的多导向sgRNA表达设计，提升敲除效率。
- 标记可选： 内含药筛标记和荧光标记，可根据实验需要自由选择。
- 流程精简： 无需自行设计和构建载体。
产品组成
- 表达 Cas9 核酸酶的载体
- 表达靶向目标基因的 sgRNA 载体和non-targeting sgRNA载体
- 验证套装（含鉴定引物及对照品）
方案选择
| 方案类型 | 适用场景 | 递送方式 |
|---|---|---|
| 质粒转染方案 | 易于转染的细胞系（如 HEK293T、HeLa 等） | 脂质体转染或电转 |
| 慢病毒感染方案 | 难转染细胞（如原代细胞、干细胞、悬浮细胞等） | 慢病毒颗粒感染 |
适用范围
- 基因功能研究
- 药物靶点发现与验证
- 细胞模型构建
- 合成致死研究
- 基因治疗前期的靶点筛选
实验流程
① Day 1 — 细胞准备
→ 接种目标细胞至适当密度。
② Day 2-3 — 转导/转染
→ 根据方案选择，进行质粒转染或慢病毒感染。
③ Day 3-5 — 筛选与扩增
→ 根据载体携带的筛选标记进行药物筛选或荧光分选，获得富集敲除细胞群体。
④ Day 5-7 — 效率验证（混合克隆）
→ 使用验证套装中的鉴定引物，通过 PCR 及测序确认靶基因的编辑效率。
⑤ Day 7-30 — 单克隆筛选（可选）
对成功敲除的混合克隆细胞进行单克隆培养，使用验证套装中的鉴定引物，通过 PCR 及测序确认单克隆细胞的基因型。
以上产品描述基于标准实验方案。具体实验参数需结合研究目标和样本条件确定。欢迎联系技术团队获取详细实验方案与技术支持。
Quick-KI® 是一款即用型（all-in-one）基因定点突变试剂盒，基于Ⅱ型 CRISPR-Cas9 系统与同源定向修复（HDR）机制开发。试剂盒内含经验证高效切割的 gRNA-Cas9 表达质粒、Donor 供体质粒及验证套装，通过共转染将两者递送至细胞体内，gRNA 引导 Cas9 蛋白对靶基因特定位点进行切割，产生 DNA 双链断裂（DSB），同时以 Donor 质粒携带的突变序列为修复模板，利用细胞自身的 HDR 途径实现目标位点的精准点突变。
针对人、小鼠等物种的编码基因，采用预设计方案，无需自行设计和构建 Donor 载体，帮助研究者高效完成细胞基因定点突变实验。
产品特点
- 即用型： All-in-one 设计，内含 gRNA-Cas9 质粒、Donor 质粒及验证套装。
- 精准点突变： 基于 HDR 机制实现单碱基或小片段精准替换，编辑结果可稳定遗传。
- 双标记筛选： gRNA-Cas9 质粒携带 BSD 抗性标记，Donor 质粒携带 Puro 抗性标记和 mCherry 荧光标记，支持药物筛选和流式分选两种富集方式。
- 流程精简： 无需自行设计和构建 Donor 载体，减少实验前期准备时间。
- 验证完善： 随盒提供基因分型鉴定引物及 PCR Master Mix，方便快速验证编辑结果。
产品组成
- gRNA-Cas9 表达质粒（含 BSD 抗性标记）
- Donor 供体质粒（含 Puro 抗性标记及 mCherry 荧光标记）
- Cell Lysis Buffer（细胞裂解液，用于快速提取基因组 DNA）
- 验证套装（含 PCR Master Mix、两对巢式 PCR 鉴定引物及 ddH₂O）
方案选择
| 方案类型 | 适用场景 | 筛选方式 |
|---|---|---|
| 脂质体转染方案 | 易于转染的贴壁细胞（如 HEK293T、HeLa 等） | 药物筛选（Puro/BSD）或流式分选（mCherry） |
| 电转方案 | 难转染细胞（如悬浮细胞、原代细胞等） | 药物筛选（Puro/BSD）或流式分选（mCherry） |
适用范围
- 基因功能研究（点突变对蛋白功能的影响）
- 疾病模型构建（模拟临床突变位点）
- 药物靶点验证与耐药机制研究
- 基因治疗前期的突变体筛选
- 蛋白质结构与功能关系研究
实验流程
① Day 1 — 细胞准备
→ 接种目标细胞至适当密度，确认转染效率 > 30%。
② Day 2 — 共转染
→ 将 gRNA-Cas9 质粒与 Donor 质粒按 1.5:1 比例混合，进行脂质体转染或电转。
③ Day 3-5 — 筛选与富集
→ 根据标记选择，进行药物筛选（Puro/BSD）或流式分选（mCherry 阳性），获得富集的混合克隆细胞（Pool）。
④ Day 5-7 — 混合克隆鉴定
→ 使用验证套装中的巢式 PCR 引物，通过 PCR 及 Sanger 测序确认混合克隆的编辑效率。
⑤ Day 7-30 — 单克隆筛选
对混合克隆细胞进行有限稀释，挑取单克隆培养，通过巢式 PCR 及 Sanger 测序验证单克隆细胞的基因型。
以上产品描述基于标准实验方案。具体实验参数需结合研究目标和样本条件确定。欢迎联系技术团队获取详细实验方案与技术支持。
